Clinimix E（克灵麦中4-胍基丁酸的测定-辽宁化工2022年02期

摘      要： 目的：建立Clinimix E（克灵麦）中氨基酸注射液4-胍基丁酸的测定方法。方法：采用HPLC法测定，以HILIC为填充剂;以乙腈-0.02 mol·L-1磷酸二氢钠溶液（用氢氧化钠试液调节pH值至5.50）（75∶25）为流动相，流速为每分钟1.0 mL;检测波长为200 nm;柱温为35 ℃。结果：在1.232～24.631 µg·mL-1范围内，4-胍基丁酸的浓度与峰面积之间线性关系良好;该方法的重复性和准确度的 RSD 值分别为2.9%、0.8%。结论：该方法专属性、重现性、准确度良好，可用于Clinimix E（克灵麦）中氨基酸腔袋4-胍基丁酸的测定。

关  键  词：4-胍基丁酸;HPLC法;克灵麦

中图分类号：TQ46     文献标识码： A     文章编号： 1004-0935（2022）02-0281-03

Clinimix E（克灵麦）是一种氨基酸葡萄糖注射液双室袋肠外营养制剂，原研公司为Baxter公司，适用于口服或肠内营养供给不能、不足或禁忌者，通过肠外营养补充热量、蛋白质和电解质，还可用于负氮平衡的治疗[1]。本品含有人体合成蛋白质所需的15种氨基酸，包含8种必需氨基酸（亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸），2种半必需氨基酸（精氨酸、组氨酸），以及5种其他非必需氨基酸（丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸、酪氨酸）。本品所含氨基酸组成与优质蛋白相似，必需氨基酸/总氨基酸=41.3%，必需氨基酸/总氮=2.5，支链氨基酸/总氨基酸=19%，本品不含有亚硫酸盐抗氧化剂，符合目前通用的优质营养型复方氨基酸的标准[2-7]。

复方氨基酸注射液在生产及贮藏过程中有可能会产生多种氨基酸杂质。目前报道较多的为色氨酸的相关杂质，检测方法大多为液质联用法和高效液相色谱法[8-16]。通过氨基酸降解试验可知，精氨酸氧化降解可产生4-胍基丁酸。本研究建立了一种高效液相色谱法检测制剂中精氨酸的降解杂质4-胍基丁酸，为完善质量控制提供依据。

1  材料与方法

1.1  仪器与试剂

高效液相色谱仪（Agilent）、PB-10 pH计（Sartorius）、SQP电子天平（Sartorius）、4-胍基丁酸对照品（8zCbieKxEfFMlRWhcmExQQ==Sigma，批号：MKBK4239V）、磷酸二氢钠、乙腈。

1.2  供试品

Clinimix E（克灵麦）氨基酸腔袋药液（Baxter Healthcare Corporation，批号：P377481）。

1.3  实验方法

1.3.1  操作步骤

取本品原液作为供试品溶液;取4-胍基丁酸对照品约10 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，以75%乙腈溶解并稀释至刻度，作为对照品贮备液;精密量取对照品贮备液1 mL，置10 mL量瓶中，以75%乙腈稀释至刻度，作为对照品溶液。照高效液相色谱法测定，以HILIC为填充剂;以乙腈-0.02 mol·L-1磷酸二氢钠溶液（用氢氧化钠试液调节pH值至5.50）（75∶25）为流动相，流速为每分钟1.0 mL;检测波长为200 nm;柱温为35 ℃。

1.3.2  方法学考察

1.3.2.1  色谱条件筛选

通过对缓冲盐pH、流动相的比例、洗脱方式、色谱柱以及进样体积的筛选，最终确定4-胍基丁酸的检测方法。

1.3.2.2  检测波长选择

取4-胍基丁酸对照品适量，以75%乙腈溶解制成适当浓度的溶液。采用高效液相色谱仪（HPLC-DAD）在190～400 nm波长处进行测定，记录色谱图。

1.3.2.3  专属性

按处方配制除精氨酸以外的阴性样品，取样品及阴性样品分别在酸、碱、氧化、高温、光照条件下破坏，按照1.3.1中的色谱条件测定。

1.3.2.4  线性

取4-胍基丁酸的对照品适量，用75%乙腈溶解并稀释制成不同浓度的对照品溶液，进样进行考察。记录色谱图，以浓度作为横坐标，峰面积作为纵坐标，计算标准曲线方程。

1.3.2.5  重复性试验

按照1.3.1中操作步骤，制备对照品溶液及供试品溶液。精密量取对照品溶液和供试品溶液各2 µL，注入液相色谱仪，记录色谱图，计算6份供试品溶液中4-胍基丁酸含量的相对标准偏差（RSD%）。

1.3.2.6  准确度试验

取4-胍基丁酸对照品适量，以75%乙腈制成每1 mL约含50 µg的对照品溶液，分别取上述对照品溶液1.0、2.0、3.0 mL置于10 mL量瓶中，使用样品溶液稀释至刻度。每个浓度平行制备3份样品，精密量取2 µL，注入液相色谱仪，记录色谱图，计算9份回收率及其相对标准偏差（RSD）。

2  结果与分析

2.1  色谱条件筛选

通过对缓冲盐pH、流动相的比例、洗脱方式、色谱柱以及进样体积的筛选，最终确定4-胍基丁酸的检测方法为：以HILIC为填充剂;以乙腈-0.02 mol·L-1磷酸二氢钠溶液（用氢氧化钠试液调节pH值至5.50）（75∶25）为流动相，流速为每分钟1.0 mL;检测波长200 nm;柱温35 ℃，进样体积2 µL。

2.2  检测波长选择

采用高效液相色谱仪（HPLC-DAD）在190～400 nm波长处进行测定对照品溶液，结果显示4-胍基丁酸在200 nm附近处有最大收峰，因此选择200nm作为4-胍基丁酸的测定波长。

2.3  专属性

按处方配制除精氨酸以外的阴性样品，取样品和阴性样品分别于酸、碱、氧化、高温、光照条件下破坏后，产生的降解杂质与4-胍基丁酸峰分离良好，不干扰4-胍基丁酸的测定;阴性、空白溶剂均不干扰样品中4-胍基丁酸的检测，说明该色谱条件专属性良好。

2.4  线性

取4-胍基丁酸对照品适量，用75%乙腈溶解并稀释制成不同浓度的对照品溶液，进样考察。记录色谱图，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，计算标准曲线方程。结果表明，4-胍基丁酸进样浓度在1.232～24.631 µg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系，其线性方程为y = 4.003 3x-0.622 8 （ r= 0.999 ）。

2.5  重复性

按照1.3.1中操作步骤，制备对照品溶液和供试品溶液。精密量取对照品溶液和供试品溶液各2 µL，注入液相色谱仪，记录色谱图，计算6份供试品溶液中4-胍基丁酸含量的相对标准偏差（RSD%），结果表明，该方法重复性良好。

2.6  准确度

取4-胍基丁酸对照品适量，以75%乙腈制成每1 mL约含50 µg的对照品溶液，分别取上述对照品溶液1.0、2.0、3.0 mL置于10 mL量瓶中，用样品溶液稀释至刻度。每个浓度平行制备3份样，精密量取2 µL，注入液相色谱仪，记录色谱图，计算9份样品回收率及其相对标准偏差（RSD）。结果表明，该方法回收率高，满足分析测定的要求。

3  结 论

本研究建立了肠外营养制剂Clinimix E（克灵麦）中氨基酸注射液精氨酸杂质4-胍基丁酸的测定方法。采用高效液相法，选择Hilic为填充剂的色谱柱，磷酸盐乙腈缓冲系统作为流动相。

试验结果表明，氨基酸注射液经酸破坏、碱破坏、氧化破坏、高温破坏和光照破坏后，产生的降解产物均对4-胍基丁酸的测定无干扰。该方法专属性好、线性范围广、简便快捷结果准确，为Clinimix E（克灵麦）及同类产品中精氨酸杂质4-胍基丁酸的测定提供一定的参考。

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Determination of 4-Guanidinobutyric Acid Content in Clinimix E

WU Hui-bin， WU Xiao-dong

（Liaoning Haisco Pharmaceutical Co.， Ltd.， Xingcheng Liaoning 125100， China）

Abstract： A method for determination of 4-guanidinobutyric acid in amino acid injection of Clinimix E by HPLC was established. Hilic was used as filler， acetonitrile-0.02 mol·L-1 buffer solution（regulating pH to 5.50）（75∶25） was used as mobil phase，the flow rate was 1.0 mL·min-1，the test wave length was 200 nm， the column temperature was 35 ℃. The results showed that， there was a good linear between the mass concentration of 4-guanidinobutyric acid and peak area at the range of 1.232～24.631 µg·mL-1.The RSD values of the reproducibility test and the precision test were 2.9% and 0.8%， respectively. So， the method has good indentification， reproducibility and accuracy， and can be used to determine the 4-guanidinobutyric acid in aminic acid injection of Clinimix E.

Key words： 4-Guanidinobutyric acid; HPLC; Clinimix E